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学术专栏

研究证实:龟龄集的肉苁蓉炮制工艺具有增效作用!

来源: 日期:2022-02-21 浏览:826

肉苁蓉,俗称“沙漠人参”,典型的补益类中药,在我国药用历史悠久。在临床上,它主要用于治疗肾阳不足,精血亏虚,不孕,腰膝酸软,筋骨无力,肠燥便秘等症。在明清时期,中医用黄酒炮制肉苁蓉,因为传统中医药理论认为,酒制引药入肾,可以使补肾类药物更好的发挥药效。


据悉,广誉远国药有限公司在生产古代经典古方龟龄集时,沿用的便是明清时期的肉苁蓉古法炮制工艺。该炮制工艺不同于中国药典及市场上流通的常规的炮制,并于2004年被列为秘密级国家秘密技术。


近期,国家重点研发计划首席科学家、教育部长江学者特聘教授、岐黄学者张卫东教授带领海军军医大学团队,对龟龄集中肉苁蓉炮制前后的成分变化进行研究,并成功发现了差异性标志物。相关研究论文“Comprehensive profiling and potential chemical markers identification in raw and processed Cistanche tubulosa by combining ultra-high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry and MS/MS-based molecular networking”,已发表在Analytical and Bioanalytical Chemistry(IF:4.157)杂志上。


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分子网络方法为中药炮制研究提供新思路


本研究首先采用UPLC-Q-TOF/MS对肉苁蓉进行数据采集,结合化学成分数据库及分子网络进行数据处理,对其化学成分进行了全面的化学表征。基于MS/MS谱相似性,分子网络中生品和炮制品的肉苁蓉提取物在负离子模式下利用前体离子生成可视化节点图,共有85个化合物被鉴定。在分子网络中,苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木脂素类及其他类化合物可以形成不同的化合物簇,能够相互区分。并且,由于相同的预处理方法,每个节点上的相对比例可以代表该化合物在炮制前后的相对含量(图1)。


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(图注:图1. 炮制前后肉苁蓉中化合物在分子网络中的鉴定结果(A:苯乙醇苷类; B:环烯醚萜类; C:木质素类; D:苯甲醇苷类; E:其他类))


发现34个炮制前后化学标志物


随后,本研究结合分子网络和Progenesis QI两种方法,对肉苁蓉及其炮制品的差异性化合物进行了分析。根据分子网络的方法,可以直观的找到代表每一个化合物的节点。按照参数设置,每一个节点上蓝色代表生品,红色代表炮制品。由于完全相同的前处理方式,它们所占的相对比例就代表其相对含量。据此,一共找到了34个化合物作为炮制前后的化学标志物。具体信息见图2。


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(图注:图2. 肉苁蓉中34个差异性化合物结构式)


由于该方法首次应用,用多元统计的方法对其准确性进行了验证。通过OPLS-DA得分图,区分了肉苁蓉生品和炮制品(图4)。根据VIP>1.5(图4),找到了对此次区分贡献值比较大的化合物,最终34个化合物被确定和分子网络的分析结果一致。


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(图3. 炮制前后肉苁蓉OPLS-DA图(a)及VIP图(b))

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(图4. 炮制前后肉苁蓉中34个差异性标志物的热图)


炮制后化学标记物的含量半增半减


通过分子网络法系统分析了肉苁蓉醇提物中的化学成分,综合分子网络和多元统计分析法分析了古法炮制后肉苁蓉中的潜在化学标志物。经过分析,共鉴定了85个化学成分及34个差异性化合物。与生品肉苁蓉相比,34个潜在化学标记物在炮制后有17种化合物的含量增加(包括4个苯乙醇苷类、1个苄基糖苷、4个环烯醚类、2个木脂素类和6个其他化合物),17种化合物的含量减少(包括16个苯乙醇苷类和1个其他类化合物)。


有研究发现,在加工炮制的过程中,肉苁蓉可能会发生异构化、氧化、酶解、水解等反应。苯乙醇苷类化合物是中药肉苁蓉中最主要的代表性化学成分,其结构中含有的糖苷键和乙酰基在酶作用下容易水解或在高温下分解,这可能是这些化合物加工后含量普遍下降的原因。本研究结果有助于进一步阐明肉苁蓉在炮制加工过程中所发生的化学反应。然而,这些在炮制过程中发生变化的成分是否为影响肉苁蓉药效作用的主要生物活性成分,还需要结合化学、药理学等多门学科进行进一步的研究。


本研究所用的方法是一种快速有效的分析中药中化合物的方法。一方面,用分子网络法对肉苁蓉提取物的化学成分进行了全面的分析,另一方面,利用分子网络和多元统计分析快速准确地测定了炮制前后肉苁蓉中的差异性标志物。研究结果得到了肉苁蓉原药材的化学成分及炮制前后肉苁蓉的化学标记的全面信息,并为其他中药的化学成分和化学标记的综合表征提供了一种方法。此外,该方法也提供了一个新的策略,不仅可以应用在炮制前后中药材,也可以应用于同种不同属的中药材,原产地不同的中药材,不同批次的中药材等等。

 

400-118-1541